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一种肿瘤治疗的潜在靶点之钙网蛋白

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  • 2018-7-26 15:32
  • medicilon 发表于 2019-11-20 15:03:49 | 显示全部楼层 |阅读模式
    钙网蛋白是热休克蛋白家族成员之一,在生物界种属间高度保守,主要分布于内质网,而且人、猪以及鼠有50%的钙网蛋白基因是相同的。越来越多证据表明,钙网蛋白在不同肿瘤中异常表达,这为钙网蛋白成为一种新的肿瘤标志物提供了依据。由于钙网蛋白属于天然自身抗原,它在多种类型的恶性肿瘤中均有异常表达,因此通过检测患者体内的钙网蛋白表达水平将有助于疾病的诊断。而进行钙网蛋白的重组蛋白纯化研究,有望为研究其生物学功能奠定基础。

    1、钙网蛋白的大肠杆菌表达研究

    为了研究钙网蛋白的生物学功能,有研究者构建了重组钙网蛋白(CRT)原核表达质粒并优化其大肠杆菌表达的条件[1]。研究者采用RT-PCR从总RNAs中克隆小鼠CRT的cDNA并构建原核表达重组质粒(pET15b-CRT)。将构建成功的质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,检测在不同温度,不同诱导时间及不同浓度异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)条件下重组CRT的表达水平。结果成功构建了重组CRT原核表达载体;诱导重组CRT的最佳条件是不加IPTG在30℃培养20h,此条件下重组蛋白表达水平比加入IPTG诱导高大约6.29倍;经过镍柱纯化后的CRT重组蛋白具有良好的抗原性,可被特异性抗体识别。结果研究者成功在大肠杆菌内表达重组CRT并明确了其最佳的表达条件,这种方法的建立为后续CRT功能研究奠定了一定的基础。

    大肠杆菌表达系统是重要的原核表达系统,具有遗传背景清楚、易于培养和控制、转化操作简单和表达水平高等优点。美迪西科研人员建立了成熟的大肠杆菌表达及纯化服务平台,提供包括各种重组蛋白以及其复合物在大肠杆菌中的表达与纯化服务。

    2、钙网蛋白可能是喉癌治疗的潜在靶点

    有研究者探讨了钙网蛋白在人喉癌细胞中的表达及临床意义[2]。研究者应用荧光定量PCR(RT-PCR)、蛋白印记(Western blot)检测CRT在mRNA与蛋白水平上的差异性变化。结果喉癌组织CRT的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),CRT mRNA表达升高67%,CRT蛋白表达升高71%。研究结果发现 CRT可能参与了喉癌的发生、发展过程,CRT可能是喉癌一个潜在的基因治疗靶点。

    3、钙网蛋白的高表达与大肠癌的发生发展的关系

    为了研究钙网蛋白在大肠癌与癌旁组织中的表达及其意义[3],研究者采用二维色谱与质谱联用技术检测20例大肠癌患者肿瘤组织及癌旁组织CRT的表达情况。结果通过二维色谱与质谱联用技术对大肠癌肿瘤组织及癌旁组织进行分析,对有差异的蛋白质点进行质谱鉴定,发现CRT在癌组织中较癌旁组织中表达升高,并通过免疫印迹进一步验证了其准确性。因此 CRT蛋白的高表达可能与大肠癌的发生、发展有一定的关系。

    4、钙网蛋白有可能成为卵巢癌治疗的靶点

    还有研究者发现钙网蛋白在上皮性卵巢癌中高表达[4]。研究者采用免疫组化法检测40例上皮性卵巢癌、20例卵巢良性肿瘤及10例正常卵巢组织中CRT的表达情况。结果发现CRT在上皮性卵巢癌中表达明显高于卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织,CRT在上皮性卵巢癌中的表达与组织病理分级、临床分期、淋巴结转移均有关,与组织学分型无关。因此CRT表达升高在上皮性卵巢癌的发生、分化、进展过程中起重要的作用,CRT有可能成为早期诊断的新标志物及治疗卵巢癌的新靶点。

    而且CRT在非小细胞肺癌中呈高表达,其阳性表达与淋巴结转移和分期相关,可能参与非小细胞肺癌的发生、发展过程。总之,大量研究表明,CRT对不同肿瘤的发展具有重要的影响。随着CRT在肿瘤发生发展过程中所扮演的角色的逐渐清晰,发现CRT作为一种新的肿瘤标志物是有可能的。

    [1] 重组钙网蛋白原核表达条件优化及蛋白纯化[J].

    [2] 钙网蛋白在人喉癌细胞中的表达及临床意义[J].

    [3] 钙网蛋白在大肠癌组织的表达及意义[J].

    [4] 钙网蛋白在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义[J].

    临床药师网,伴你一起成长!微信公众号:clinphar2007

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    cry
    还木有人打赏~
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